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明膠酶譜法試劑盒的染色步驟及使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間：2022-10-24      瀏覽次數(shù)：612
　　明膠酶譜法試劑盒的染色步驟：
 
　　1、此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動(dòng)2h；
 
　　2、傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；
 
　　3、以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動(dòng)2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景(通常此過(guò)程需要2～4h，也可脫色過(guò)夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景)；
 
　　4、對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對(duì)凝膠進(jìn)行處理后保存。安全性：含有甲醇，無(wú)特殊毒性，按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。
 
　　明膠酶譜法試劑盒的使用注意事項(xiàng)：
 
　　1、制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡。
 
　　2、明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。
 
　　3、用大梳子。
 
　　4、孵育液的PH在7.5-7.6，復(fù)性的TRITON時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)有絮狀物，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的。
 
　　5、孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中，因?yàn)闀?huì)改變孵育液的PH值，在普通孵箱即可。
 
　　6、細(xì)胞樣本用PBS5倍體積震蕩裂解，估算細(xì)胞的體積，然后加入5倍體積的PBS，渦旋振蕩15-30s，而后靜置或低速離心或者手動(dòng)震蕩。
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