上海信帆生物科技有限公司生物實(shí)驗(yàn)室，通過ELISA實(shí)驗(yàn)探討體外條件下分離、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的有效方法,對(duì)所獲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性，以及用GENOMIC試劑盒檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白含量對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用。

        此方法實(shí)驗(yàn)由實(shí)驗(yàn)室的王主任和張研究院負(fù)責(zé)進(jìn)行。首先采用密度梯度離心法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,用貼壁培養(yǎng)法對(duì)所獲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代、純化和擴(kuò)增,觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志物;將分離純化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)于Ⅰ型膠原蛋白上面,對(duì)細(xì)胞的堿性磷酸酶表達(dá)、細(xì)胞礦化形成鈣化結(jié)節(jié)的能力進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果分離的細(xì)胞1天后*貼壁,貼壁的細(xì)胞平均10d后形成細(xì)胞克隆,所獲細(xì)胞形態(tài)均一,呈成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng),細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物。在Ⅰ型膠原蛋白上面培養(yǎng)后,細(xì)胞堿性磷酸酶顯著表達(dá),Von.Kossa染色可見礦化結(jié)節(jié)形成。

      結(jié)論密度梯度離心法分離,貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)所得細(xì)胞,可以有效分離、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。用此種方法獲得的細(xì)胞具有骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。Ⅰ型膠原蛋白能夠促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。