硫酸葡聚糖-瓊脂糖

1 、產(chǎn)品介紹

NuPerley DexS-HbP和NuPerley  DexS-VirS是將硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）鍵合在新一代高剛性瓊脂糖微球NuPerley 上形成的一種親和層析分離介質(zhì)。硫酸葡聚糖又稱右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有與肝素類似的的生物活性，是一種非動(dòng)物源的仿肝素配基，填料產(chǎn)品被稱為仿肝素親和填料。

NuPerley DexS-HbP的含硫量相對(duì)低（40~80μmol/mL），可用于蛋白的親和分離、純化，例如血漿蛋白。同時(shí)，硫酸酯是一種優(yōu)良的耐鹽型陽(yáng)離子交換配基，NuPerley DexS-HbP也可作為陽(yáng)離子交換填料，對(duì)溶菌-酶的結(jié)合量大于60mg/mL，且在50~150mM NaCl鹽濃度下仍結(jié)合良好。

NuPerley DexS-VirS的含硫量相對(duì)高（70~130 μmol/mL），主要用于用于病毒和病毒樣顆粒（VLP）的捕獲與純化。

2 、產(chǎn)品特點(diǎn)與技術(shù)指標(biāo) 

注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；b 10 cm 柱高下的最大測(cè)試流速。

3 、使用方法參考

3.1  色譜柱裝填

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時(shí)，填料的色譜柱裝填方法。

（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。裝柱液一般為純水，也可含10~100 mM NaCl。

（2）填料用量計(jì)算：通過(guò)沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全讀取的穩(wěn)定 體積。NuPerley DexS-HbP和NuPerleyDexS-VirS 的壓縮比為~1.10。為使達(dá)到裝柱比，可通過(guò)柱頭下壓的方法，也可以通過(guò)高流速壓柱。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。

（4）裝柱填料懸液準(zhǔn)備：將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤脒m量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

（5）裝填前準(zhǔn)備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的純水，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時(shí)使用裝柱器），為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。

（7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過(guò)高流速（推薦流速見(jiàn)下表，注意柱壓不超過(guò)0.3MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)記界面穩(wěn)定時(shí)的柱高。停泵，打開(kāi)柱頭上的閥門(mén)/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門(mén)/堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置下方與壓縮比對(duì)應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。

3.2  柱效測(cè)定和評(píng)價(jià)

完成裝柱后、使用前可通過(guò)柱效測(cè)定和評(píng)價(jià)可以確認(rèn)層析柱裝填質(zhì)量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對(duì)稱因子（As）來(lái)評(píng)價(jià)。

3.3 平衡與上樣（Equilibration & Loading）

在上樣前，可用初始緩沖液A 在操作流速下平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH  等參數(shù)不變。根據(jù)應(yīng)用不同，本產(chǎn)品的緩沖液體系可為磷酸鹽、檸檬酸鹽和Tris-HCl 等，pH 為4~9 居多，例如10 mM PB + 150 mM NaCl ，pH7.5。

樣品通常溶于上述緩沖液A，或者將樣品溶液進(jìn)行換液處理，置換成緩沖液A 體系。上樣量可按“mg 目標(biāo)蛋白/mL  填料"來(lái)設(shè)定，通常為DBC10% 的50~80%，例如NuPerley DexS-HbP 產(chǎn)品對(duì)溶菌-酶的DBC10%為~10 mg/mL，純化 BSA 時(shí)的上樣量可為5~10 mg/mL。除了DBC10%，也可以測(cè)試上樣流穿液中的目標(biāo)蛋白確定上樣量。

3.4  洗脫（Elution）

洗脫過(guò)程則可以進(jìn)一步提高緩沖液A 中的鹽濃度，添加0.5~2 M 的NaCl 可將目的 蛋白有效洗脫。在前期工藝篩選時(shí)建議用線性梯度洗脫以確定合適的洗脫濃度，在工藝優(yōu)化和確定時(shí)建議用階躍梯度洗脫，以節(jié)省洗脫液體積和提高效率。

3.5  再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）

通常上述的再生過(guò)程可將填料徹-底清洗。若發(fā)生柱壓升高，或?yàn)榱吮苊饨徊嫖廴?，可采用以下溶劑進(jìn)行再生與在位清洗：1~2 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或 30%  異丙醇等。在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱體積的純水除去上述溶劑。

3.6  填料保存

填料的初始保存液為 20%乙醇，使用過(guò)后可繼續(xù)用相同的保存液，也可在20%乙醇的基礎(chǔ)上添加0.1~1 M NaCl。保存溫度在2~8 ℃為宜，不可凍存。