信帆生物提供：堿性磷酸酶（ALP）染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹：ALP染色（堿性磷酸酶染色）是一種用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中堿性磷酸酶（ALP）活性的實(shí)驗(yàn)方法。ALP是一種廣泛存在于多種組織（如骨骼、肝臟、腎臟和胎盤）中的酶，其活性常被用作干細(xì)胞多能性、成骨細(xì)胞分化以及某些疾病（如肝病和骨?。┑臉?biāo)志物。
檢測(cè)原理：
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.、新鮮組織冰凍切片 6-8um 或者石蠟切片經(jīng)脫蠟至水洗；
2、放入孵育液中置于 37℃溫箱內(nèi)孵育。冰凍切片 10-30min，石蠟切片 1-2h（陰性對(duì)照片用陰性對(duì)照孵育液）；
3、蒸餾水稍洗；
4、配制ALP孵育液：按照1:1的比例混合B1:AS-BI染色液和B2:FBB染色液
5、切片如ALP固定液固定3min，水洗；
6、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15~20min，水洗；
7、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3~5min，水洗；
8、冰凍切片用甘油明膠固定；石蠟切片常規(guī)脫水、透明及封固。
注意事項(xiàng)：
1、樣本處理：確保樣本新鮮，并及時(shí)進(jìn)行固定處理，避免影響酶的活性。
2、染色液配制：ALP染色液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致失效或降低陽(yáng)性強(qiáng)度。
3、實(shí)驗(yàn)條件控制：嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時(shí)間和pH值等，以確保染色效果的準(zhǔn)確性和可靠性。
4、陽(yáng)性對(duì)照：每次染色時(shí)，應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，以便對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。

僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途！